PCR扩增理论方程：起点定量与终点定量：起点的DNA量为“天然”的含量，更有意义；终点的DNA量为经过PCR过程“加工”的量，存在部分“失真”。
现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2－△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。
qRT-PCR是一种相对表达定量的方法，他的计算方法有很多，常用的相对定量数据分析方法是KJ Livak（Applied Biosystems）等人在2001年提出的“比较Ct法相对定量”，即：利用ΔCt值差异来推算基因表达差异（Ct目的基因 – Ct内参基因 = ΔCt），该方法的具体计算方法请参见文章： qRT-PCR相对定量计算详解 。
方法 用Line—Gene FQD-33A型荧光定量PCR检测系统检测本院门诊和病房乙肝病人血清HBV DNA77份，分别用最大二阶导数法和样点拟合法进行结果分析。结果 发现两种分析方法的总体相关性较好（r=0．978）。
实时荧光定量 PCR ，简称 RT-QPCR， 属于 Q-PCR 的一种，目前该技术已得到广泛应用，如：扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法。
第一步：在电脑上安装好GraphPad Prism软件，安装此软件在百度上可以下载，一般下载GraphPad Prism5中文版的。第二步：完成第一步后在电脑上打开GraphPad Prism软件，会弹出对话框welcome to GraphPad Prism，点击左边的Column，选择右边的choose a graph第一排的第四个柱形图。
这个有个很好用的免费软件ImageJ，是NIH编的，做这个分析最好了。有很多凝胶成像仪都自带可以分析电泳条带灰度的软件，操作也很简单。
用PCMark或Creatacard打开。Futuremark已于2007年10月18日正式发布了新一代PCMark基准测试软件，不过并没有按照惯例叫作“PCMark07”，而是称为“PCMarkVantage”，而且这个新版本是专为WindowsVista32/64bit打造的，不再支持Windows2000XP。CreataCard是针对平板电脑的应用程序创建和编辑的贺卡。
1、学习做Realtime PCR， 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间，熔 融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁.不同的处理方法得到不 同的结果. 做的是相对定量，SYBR Green， 选用2^（-△ △ Ct）法 内参基因：对照。
2、pcr柱状图是三个重复的数据可以去掉聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
3、不需要。根据相关资料查询显示，如果一起处理可能会导致实验数据出现差错。这三个重复计算需要分别处理，在处理完成后，舍弃掉差别大的实验数据，再求平均.这是平行实验的处理方法。
4、离群值。 这表示同一组的几个个体之中，有一个/几个非常特殊，数值与其他个体相差很大的，不能够代表这个组而在数据分析时需要剔除的。比如1， 4， 2， 4这四个个体同1， 3， 5， 7这四个个体来比较。如果只看均值，为4比4，无任何差别。
5、重复测量三次的数据处理方法：测量某个角3测回，将不合格的数据删除，如不满足要求还需要去补测，然后将剩余数据进行平差计算。前后测量设计：不能同期观察试验结果；前后两次观察结果通常与差值不独立，大多数情况第一次观察结果与差值存在负相关的关系；除了分析平均差值外，还可进行相关回归分析。